Dados para ensaio enzimático: grupo (Awana e Iaquine) e grupo



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Dados para ensaio enzimático: grupo 3 (Aline e Patricia)

Solução estoque de enzima (luminase): 40 U/ml


Umidade do bagaço BPT: 80 %

Massa seca – 1,25 g


Exemplo de calculo:
5 U ----- 1 g

X ----- 0,125 g


X = 0,625 U
40 U ---- 1 ml

0,625------ Y




[E] U/g

Vol enz (microlitros)

Vol tampao fosfato de sódio 50 mM pH 8 , com a 0,01% de azida sodica

(ml)


5

15,6

20

10

31,2

20

20

62,4

20

50

156

19,8

100

312

19,7










Y = 15,6 microlitros de enzima


Massa água a ser adicionada para ficar na consistência de 5%
Masssa úmida de bagaço: 6,25 g (no caso da umidade ser 80%)
Volume do ensaio – 25 ml
25 = [6,25 (m úmida) - 1,25 (m seca)] + 0,015 (volume de enzima) + volume de tampão
Volume de tampão = 20 ml

EM UMA PROVETA COLOCAR O VOLUME DE TAMPÃO E ACRESCENTAR COM UMA PIPETA AUTOMATICA O VOLUME DE ENZIMA. Agitar e verter no frasco erlenmeyer de 125ml sobre o bagao que foi previamente pesada (m assa úmida em g)


Imediatamente após a adição da enzima ao substrato deve ser retirada uma amostra de 1 ml, ferver por 5 min e congelar (tempo zero).

Colocar o erlenmeyer no shaker a 50 oC com agitação de 120 rpm.



Após os tempos de 5, 10, 15, 30 min retirar amostras e repetir o procedimento de fervura antes de congelá-las.

Continuar a retirada da amostra com 2 h, 4 h, 6 h , 24 h , 48 h, 72 h e 7 dias.

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