Determinação de Patógenos



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PROPOSTA DA CETESB PARA O ANEXO 1-A5

10o GT Uso Agrícola de Lodo de Esgoto – 6 e 7 de abril de 2005

Determinação de Patógenos
Coliformes termotolarantes:

  • US Environmental Protection Agency. Environmental Regulations and Technology - Control of Pathogens and Vector Attraction in Sewage Sludge (Includind Domestic Septage). Under 40 CFR Part 503. Appendix F: Sample Preparation foe fecal coliform test and Salmonella sp Analysis, p. 137, EPA/625/R-92/013, 2003. (www.epa.gov/ORD/NRMRL/pubs ).

  • CETESB. Coliformes fecais - Determinação em amostras de água pela técnica de tubos múltiplos com meio A1 - Método de ensaio. Norma Técnica CETESB L5-406, 1992, 20 p.


Salmonella

  • US Environmental Protection Agency. Environmental Regulations and Technology - Control of Pathogens and Vector Attraction in Sewage Sludge (Includind Domestic Septage). Under 40 CFR Part 503. Appendix F: Sample Preparation foe fecal coliform test and Salmonella sp Analysis, p. 137, EPA/625/R-92/013, 2003. (www.epa.gov/ORD/NRMRL/pubs ).

  • CETESB . Salmonella - Isolamento e identificação - Método de Ensaio. Norma Técnica CETESB L5.218, 1987, 42p.


Ovos viáveis de Helmintos:

  • US Environmental Protection Agency. Environmental Regulations and Technology - Control of Pathogens and Vector Attraction in Sewage Sludge (Includind Domestic Septage). Under 40 CFR Part 503. Appendix I -Test Method for Detecting, Enumerating, and Determining the Viability of Ascaris Ova in Sludge, p. 166, EPA/625/R-92/013, 2003 (www.epa.gov/ORD/NRMRL/pubs).



Vírus:

  • US Environmental Protection Agency. Environmental Regulations and Technology - Control of Pathogens and Vector Attraction in Sewage Sludge (Includind Domestic Septage). Under 40 CFR Part 503. Appendix H -Method for the recovery and assay of total culturable viruses from sludge, p. 150, EPA/625/R-92/013, 2003 (www.epa.gov/ORD/NRMRL/pubs).

  • CETESB. Método de concentração de lodo de esgoto para isolamento de enterovírus. Norma Técnica CETESB L5.506, 1988, 23p.

  • CETESB.Identificação de Enterovírus - Método de Ensaio. Norma Técnica CETESB L5.504, 1985, 22p.


MÉTODOS PROPOSTOS PELO LABORATÓRIO DE VIROLOGIA DO ICB - DRA DOLORES


  • Ensaios de detecção rápida:

reação de amplificação em cadeia pela polimerase (PCR) para pesquisa de vírus DNA como adenovírus (Ref. Santos et al., 2004);

reação de transcrição reversa seguida de amplificação em cadeia pela polimerase (RT-PCR) para pesquisa de vírus RNA como Gênero Enterovirus (Poliovírus, Echovírus, Coxsackievírus), Rotavírus, Hepatite A e outros (Tsai et al., 1994)



  • ensaios de infectividade viral e quantificação viral em culturas celulares (opção pelo mais acessível):

método de plaqueamento com resultado expresso em Unidades Formandoras de Placa (UFP) por 4g (USEPA, Norma 40CFR part 503);

método de diluição end-point com cálculo de título por método de Reed-Muench e resultado expresso em DICT50 por volume de inóculo (Ref.: Hawke, 1979);

método de imunofluorescência ou de imunoperoxidase em cultura de células com resultado expresso em Unidades Formadoras de Focos (UFF) por volume de inóculo (Ref.: Mehnert & Stewien, 1993).

Referências:

HAWKE, A. General principles underlying laboratory diagnosis of viral infections. In: E.H. LENNETTE; N.G. SCHMIDT (Ed.) – Diagnostic procedures for viral, rickettsial and chlamydial infections. Washington, D.C., APHA, 1979. p. 3-48.

MEHNERT, D.U.; STEWIEN, K.E. Detection and distribution of rotaviruses in raw sewage and creeks in São Paulo, Brazil. Appl. Environ. Microbiol., 59: 140-3, 1993.



Santos, F.M.; Vieira, M. J.; Monezi, T.A.; Hársi, C.M.; Mehnert, D.U. Discrimination of adenovirus types circulating in urban sewage and surface polluted waters in São Paulo city, Brazil. Water Science Technologie, Water Supply vol. 4 (2): 79-85, 2004.

TSAI, Y.; TRAN, B.; SANGERMANO, L.R.; PALMER, C.J. Detection of poliovirus, hepatitis A virus, and rotavirus from sewage and ocean water by triplex reverse transcriptase PCR. Appl. Environ. Microbiol., 60: 2400-7, 1994

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