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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA

CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

Programa de Pós-Graduação em Bioquímica


Código: BQA5100-13

Nome da disciplina: Tópicos Especiais em Bioquímica - Cultura de células de mamíferos e suas aplicações

Nº de Créditos: 2

Total Horas-Aula: 30

Docentes: Marcelo Farina (Coordenador), Débora Kurrle Rieger Venske e Danúbia Bonfanti dos Santos de Godoi

Semestre/Ano: 02/2014
Período: 20/10/2014 a 10/11/2014
Horário: Segunda, Quarta (vespertino)
Número de vagas: 15
Local das aulas: Sala do PPGBQA

Horário e local de atendimento a alunos:


Pré-requisitos:

  • Nenhum

Ementas:

  • Aspectos gerais sobre células animais e cultivo de linhagens celulares. Obtenção de linhagens de células de origem animal. Técnicas de cultivo de células. Infra-estrutura, reagentes e esterilização de material. Contaminações neste tipo de ambiente. Manutenção, criopreservação e caracterização de linhagens celulares. Aplicações de cultura celular em ensaios biológicos.


Metodologia de ensino:

  • Aulas teóricas / Aulas práticas / Seminários


Avaliação:

  • Apresentação de seminários;

  • Elaboração de relatório de aula prática;

  • Participação das atividades teóricas e práticas.


Conteúdo Programático e Cronograma:


Data/horário

Conteúdo

20/10 – 14:00 – 18:00


Apresentação do programa da disciplina;

Distribuição dos seminários;

Aula teórica 1: Princípios básicos de cultura celular: infra-estrutura de sala de cultura, equipamentos, normas para procedimentos em sala de cultura, reagentes (meios de cultura, tampões, etc.) e esterilização e descarte de materiais.


22/10 14:00 – 18:00


Aula teórica 2: Técnicas básicas em cultura de células: aquisição de linhagens celulares, congelamento e descongelamento, montagem de banco de células, transporte de células;

Cultivo de linhagens permanentes (células aderentes e em suspensão).

Contaminação de culturas celulares;

Aula teórica 3: Cultura de células como ferramenta para pesquisa: ensaios de citotoxicidade, coloração celular, utilização de marcadores fluorescentes, citometria de fluxo, etc;

Transferência de genes em células de mamíferos


27/10 14:00 – 18:00

2 turmas

Laboratório Prof Marcelo Farina

Sala 004 - térreo

Aula Prática: Apresentação da sala de cultura, manipulação de cultivos celulares, repique e contagem de células.

29/10 14:00 – 18:00

2 turmas

Laboratório Prof Marcelo Farina

Sala 004 - térreo

Aula Prática: tratamento de células.

30 ou 31/10 14:00 – 18:00

Sala PPGBQA e Laboratório Prof Marcelo Farina

Sala 004 - térreo

Aula Prática: Ensaios de citotoxicidade (ensaio do MTT e liberação da enzima lactato desidrogenase) e marcação nuclear com corante Hoeschst.

Discussão dos resultados.




03/11 14:00-18:00


Aula Teórica 4: Cultivo primário de células

Seminários 1, 2 e 3




05/11 14:00-18:00


Seminários 4, 5 e 6


10/11 14:00-18:00

Seminários 7, 8 e 9

Encerramento da disciplina




Seminários:

Cada aluno escolherá e apresentará um artigo científico que deverá conter experimentos utilizando cultivos celulares e uma das metodologias listadas abaixo;

Cada aluno ficará com um dos temas abaixo (sem repetição);

Além da apresentação do artigo, cada aluno deverá apresentar uma fundamentação teórica sobre a metodologia determinada.

Tempo médio para apresentação de 40 minutos.

Pequenas alterações no cronograma poderão ser realizadas de acordo com o número de inscritos.
TEMAS:


  1. Imunocitoquímica/Ensaios de colocalização/microscopia campo claro e fluorescência/Microscopia confocal;

  2. Microscopia eletrônica;

  3. Citometria de Fluxo;

  4. Transporte de moléculas/utilização de marcadores radioativos;

  5. Superexpressão gênica;

  6. Silenciamento gênico.


Bibliografia Recomendada

Butler, M. Animal cell culture and technology: the basics. 2th ed, London: Taylor & Francis, 2007.

Castilho, L.R.; Moraes, A.M.; Augusto, E.F.P.; Butler, M. Animal Cell Technology: from Biopharmaceuticals to Gene Therapy. London: Taylor & Francis, 2009.

Doyle, A.; Griffiths, J.B. Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures in Biotechnology. New York: Wiley-Liss, 1999.

Freshney, R.I. Culture of animal cells: a manual of basic technique and specialized applications. 6th ed. New York: Wiley-Liss, 2010.

Hauser, H.; Wagner, R. Mammalian Cell Biotechnology in Protein Production. Berlim: Walter De Gruyter, 1997.

Masters, J. R.W. Animal Cell Culture: a practical approach. 3rd Edition, Oxford University Press, 2000.

Moraes, A.M.; Augusto, E.F.P.; Castilho, L.R. Tecnologia do Cultivo de Células Animais: de biofármacos a terapia gênica. São Paulo: Editora Roca, 2008.

Ozturk, S.; Hu, W-S. Cell Culture Technology for Pharmaceutical and Cell-based Therapies. London: Taylor & Francis, 2006.

Peres, C.M.; Curi, R. Como cultivar células. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2005.

Stacey, G.; Doyle, A.; Ferro, M. Cell culture methods for in vivo toxicology. 1th ed.Springer, 2001.





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