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Disciplina de Biociências ( DB-110 )

Aula Prática 3

Caracterização de Aminoácidos e Proteínas

I - Reação de Heller ou Xantoprotéica: O ácido nítrico ( HNO3 ) reage com aminoácidos contendo radical aromático, ou proteínas contendo estes aminoácidos formando compostos nitro ou nitrosos de cor amarela.
Obs: O 1,0 mL do HNO3 concentrado já se encontrano tubos pré numerados. (CUIDADO É TÓXICO)


Tubos

Soluções

ácido nítrico concentrado

1

1,0 mL de H2O

1,0 mL

2

1,0 mL de saliva não centrifugada

1,0 mL

3

1,0 mL de saliva centrifugada

1,0 mL

4

1,0 mL de clara de ovo a 10%

1,0 mL

Observe e anote os resultados



Anotações:


II - Reação de Sulfidrilos: Usada na caracterização de aminoácidos contendo grupo sulfidrílico.

Aminoácidos ou proteínas contendo grupo sulfidrilico Acetato de Pb 2 SH + Pb  PbS2 (cor escura)


NaOH


TUBOS

1

2

3

4

5

Soluções

0,5 mL Água dd

0,5 mL de saliva não centrifugada

0,5 mL de saliva centrifugada

0,5 mL de Clara de ovo 10%

0,5 mL de cisteina 0,4%

NaOH 20%

0,5 mL

0,5 mL

0,5 mL

0,5 mL

0,5 mL

Acrescente 5 gotas de acetato de chumbo 5% a cada tubo

Colocar em Banho Maria Fervente por 5 minutos. Observe e explique.

Resultados


















Anotações:


III- Reação de Biureto: Caracteriza proteinas. O Reativo de Biureto contém Cu2+ que se liga aos grupos amina de cadeias polipeptidicas adjacentes.


Tubos

Soluções

Reativo de Biureto

1

1,0 mL de H2O

0,5 mL

2

1,0 mL saliva centrifugada

0,5 mL

3

1,0 mL clara de ovo 10%

0,5 mL

Compare as cores e explique

Anotações:





IV - Desnaturação pelo calor:
O tubo de ensaio enumerado Exp. IV já contem 1,0 mL de clara de ovo concentrado devendo apenas ser colocado por 3 minutos em Banho Maria fervente.

Observe o ocorrido em função do tempo, anote os resultados e explique.



Anotações:



V - Desnaturação por reagentes dos alcalóides: Enumere 3 tubos de ensaios. Ao tubo 1, adicione 1,0 mL de H2O e acrescente, gota a gota, 1,0 mL de TCA 10%. Ao tubo 2, adicione 1,0 mL de clara de ovo a 10% e acrescente, gota a gota, 1,0 mL de TCA 10%. Ao tubo 3, adicione 1,0 mL de clara de ovo a 10% e 0,5 mL de NaOH 20%. Agitar e então acrescentar, gota a gota, 1,0 mL de TCA 10%. Observe, anote os resultados e explique.

Anotações:



VI - Desnaturação por sais de metais pesados

Tubos

1

2

3

Soluções

1,0 mL de H2O

1,0 mL saliva mista centrifugada

1,0 mL clara de ovo 10%

acetato de chumbo 5%

1,0 mL

1,0 mL

1,0 mL

Observe, anote os resultados e explique.

Anotações:



VII - Precipitação por solventes orgânicos

Tubos

1

2

Soluções

1,0 mL de H2O

1,0 mL de clara de ovo a 10%

Etanol

2,0 mL

2,0 mL

Observe, anote os resultados e explique.
VIII - Precipitação por aumento de força iônica

A um tubo de ensaio 1 e a um tubo de centrífuga 2, transfira 1,0 mL de clara de ovo 10%. Acrescente a cada tubo 1,0 mL de sulfato de amônio saturado. Observe e explique. Ao tubo de ensaio 1, adicione H2O destilada (2 mL) até a redissolução do precipitado e explique. Centrifugue o tubo 2. Transfira o sobrenadante para um tubo de ensaio 3 e acrescente a este 1,0 mL de sulfato de amônio. Explique. No próprio tubo de centrífuga 2, analise o precipitado pela Reação de Biureto, acrescentando 1,0 mL de Reativo de Biureto e se necessário adicione NaOH 20% (cerca de 5 gotas).

Perguntas para a discussão:


  1. Quais aminoácidos estão presentes nas proteínas analisadas no experimento I (Reação de Heller). Identifique a estrutura destes aminoácidos responsáveis pela reação

  2. Na reação de sulfidrilos, por que os tubos são colocados no banho-maria fervente? Considerando que o produto de reação é o sulfeto de Pb, quais aminoácidos da estrutura das proteínas são responsáveis pela reação?

  3. Qual é a importancia da temperatura na desnaturação das proteínas para a pratica clinica?

  4. Explique porque etanol ou acetona provoca nas proteínas uma desnaturação reversível e explique o mecanismo?

  5. Qual é a importância da reação VI, do ponto de vista de poluição ambiental?

Prof. Dr. Jaime A. Cury Técs. Sr. Waldomiro V. Filho



Prof.a. Dra. Cínthia P. M. Tabchoury Sr. José Alfredo de Silva

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