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Disciplina de Biociências I ( DB-110 )

Bioquímica

Aula Prática 3

Caracterização de Aminoácidos e Proteínas

I - Reação de Heller ou Xantoprotéica: Caracteriza aminoácidos com Grupo R aromático. O ácido nítrico ( HNO3 ) reage com os aminoácidos fenilalalina, triptofano ou tirosina, formando compostos nitro ou nitrosos de cor amarela.


Tubos

Soluções

ácido nítrico concentrado

1

1,0 mL de H2O

1,0 mL

2

1,0 mL de saliva mista centrifugada

1,0 mL

3

1,0 mL de clara de ovo a 10%

1,0 mL

Observe, anote e interprete anote os resultados.



Anotações:


I
I -
Reação de Sulfidrilos: Usada na caracterização do aminoácido cisteína.


Tubos

1

2

3

4

Soluções

0,5 mL de H2O

0,5 mL cisteína 0,4%

0,5 mL saliva não centrifugada

0,5 mL clara de ovo 10%

NaOH 20%

0,5 mL

0,5 mL

0,5 mL

0,5 mL

Acrescente 5 gotas de acetato de chumbo 5% a cada tubo

Colocar em banho maria fervente por 5 minutos. Observe e explique.




Resultados:
















Anotações:


III- Reação de Biureto: Caracteriza cadeias polipeptídicas. O Reativo de Biureto contém Cu2+ que se liga com os grupos amina das cadeias peptídicas.


Tubos

Soluções

Reativo de Biureto

1

1,0 mL de H2O

1,0 mL

2

1,0 mL saliva mista centrifugada

1,0 mL

3

1,0 mL clara de ovo 10%

1,0 mL

Compare as cores e explique

Anotações:

I
V - Desnaturação pelo calor:


Tubos

1







Soluções

1,0 mL clara de ovo










B.M. fervente 3 min







Observe, anote os resultados e explique.

Anotações:


V - Desnaturação por reagentes dos alcalóides: Enumere 3 tubos de ensaios. Ao tubo 1, adicione 1,0 mL de H2O e acrescente, gota a gota, 1,0 mL de TCA 10%. Ao tubo 2, adicione 1,0 mL de clara de ovo a 10% e acrescente, gota a gota, 1,0 mL de TCA 10%. Ao tubo 3, adicione 1,0 mL de clara de ovo a 10% e 0,5 mL de NaOH 20%. Agitar e então acrescentar, gota a gota, 1,0 mL de TCA 10%. Observe, anote os resultados e explique.

Anotações:


VI - Desnaturação por sais de metais pesados

Tubos

1

2

3

Soluções

1,0 mL de H2O

1,0 mL saliva mista centrifugada

1,0 mL clara de ovo 10%

acetato de chumbo 5%

1,0 mL

1,0 mL

1,0 mL

Observe, anote os resultados e explique.

Anotações:


VII - Precipitação por solventes orgânicos

Tubos

1

2

Soluções

1,0 mL de H2O

1,0 mL de clara de ovo a 10%

Etanol

2,0 mL

2,0 mL

Observe, anote os resultados e explique.

VIII - Precipitação por aumento de força iônica

A um tubo de ensaio 1 e a um tubo de centrífuga 2, transfira 1,0 mL de clara de ovo 10%. Acrescente a cada tubo 1,0 mL de sulfato de amônio saturado. Observe e explique. Ao tubo de ensaio 1, adicione H2O destilada (2 mL) até a redissolução do precipitado e explique. Centrifugue o tubo 2. Transfira o sobrenadante para um tubo de ensaio 3 e acrescente a este 1,0 mL de sulfato de amônio. Explique. No próprio tubo de centrífuga 2, analise o precipitado pela Reação de Biureto, acrescentando 1,0 mL de Reativo de Biureto e se necessário adicione NaOH 20% (cerca de 5 gotas).


Perguntas para a discussão:

  1. Desenhe a estrutura química dos 3 aminoácidos caracterizados na reação de Heller e aponte a parte da estrutura envolvida nesta caracterização:

  2. Na reação de sulfidrilos, por que os tubos são colocados no banho-maria fervente? Houve formação de uma solução escura após a adição de acetato de chumbo, que é o sulfeto de chumbo. Baseado nesta informação, qual(is) aminoácido(s) foram identificados nesta reação?

  3. Qual o papel do aumento da temperatura na desnaturação das proteínas?

  4. O que ocorre quando etanol é adicionado à solução de clara de ovo?

  5. Descreva o efeito da adição de sal concentrado (sulfato de amônio) sobre a solubilidade das proteínas:

Prof.a. Dra. Cínthia P. M. Tabchoury Técs. Sr. Waldomiro Vieira Filho Prof. Dr. Jaime A. Cury Sr. José Alfredo de Silva

Estagiários: Srta. Greice Joseane Rocha Toledo



Sr. Antônio Carlos Lopretti Júnior


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